Chromatografie

Slovník pojmů

• BEH = "Bridged ethylen hybrid" (HPLC částice s vyšší odolností pH)
• DAC = "dynamic axial compression"
• DAD = "diod array detector"
• ECD = detektor elektronového záchytu
• EI = elektronová ionizace
• ELSD = "evaporative light scattering detector"
• FIA = "flow injection analysis"
• FID = plamenově ionizační detektor
• FPD = plamenově fotometrický detektor
• FPP = plně porézní částice
• GC = plynová chromatografie
• GCTQ = plynový chromatograf s trojnásobným kvadrupólem
• GCxGC = multidimenzionální plynová chromatografie
• GPC = gelová permeační chromatografie
• HETP = výškový ekvivalent teoretického patra
• HID = heliový detektor
• HILIC = kapalinová chromatografie s hydrofobními interakcemi
• HPLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografie
• HPTLC = vysokoúčinná tenkovrstvá chromatografie
• IC = iontová chromatografie
• IHPLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografie pro střední tlaky
• LVI = nástřik velkého objemu vzorku
• MCSGP = Multicolumn countercurrent solvent gradient purification (kontinuální chromatografie)
• MEPS = mikroextrakce na pevné fázi
• MLC = micelární kapalinová chromatografie
• MS = hmotnostní spektrometrie
• MSPE = Micro SPE
• NP = normální fáze
• NQAD = Nano Quantity Analyte Detector
• ODS = oktadecyl silikagel
• PDD = pulzní výbojový detector
• PFPD = pulzní plamenově fotometrický detektor
• PID = fiotoionizační detektor
• PTV = injektor s programovatelnou teplotou
• RI = refractivní index
• RP = reverzní fáze
• RRLC = "rapid resolution liquid chromatography"
• SBSE = "stirring bar sorbent extraction"
• SEC = "size exclusion chromatography"
• SFC = supercritical fluid chromatography
• SIM = "single ion monitoring"
• SMB =" simulated moving bed"
• SPE = extrakce na pevné fázi
• SPME = "solid-phase microextraction"
• SPP = částice s pevným jádrem (core-shell)
• TCD = tepelně vodivostní detektor
• TIC = celkový iontový proud
• TLC = tenkovrstvá chromatografie
• TOF = MS průletový analyzátor ("Time of Flight")
• UFLC = "ultra fast liquid chromatography"
• UPLC = "ultra performance liquid chromatography"
• UHPLC = "ultra high pressure liquid chromatography", "ultra high performance liquid chromatography"

Zvýšení poměru signál/šum v plynové chromatografii

Dnešní potřeby laboratoří jsou:

• nižší meze detekce a kvantifikace (LOD, LQD)
• zvýšení stability GC a GC/MS systémů
• vyšší inertnost a stabilita GC komponent (kolony, septa, vialky, linery, ...)

Nižší mez detekce a kvantifikace je možné dosáhnout:

• snížením šumu
• zvýšením signálu

Kovové ferulky SilTite pro GC a GC/MS

Ferulky SilTite jsou unikátní kovové ferulky designované pro spojení křemenných kapilárních GC kolon a kapilár s hmotnostními spektrometry a GC injektory. Již po prvním správném utažení poskytují ferulky SilTite těsné spojení i po mnoha teplotních cyklech bez nutnosti dalšího datahování. Ferulky SilTite se používají ve spojení s maticemi a fitinkam SGE SilTite s katalogovými čísly:

• SGE*073200
• SGE*073201
• SGE*073202
• SGE*073203

Proč volit ferulky SilTite?

• eliminace netěsností (viz obrázky níže)
• není nutné další dotahování, a to dokonce po více teplotních cyklech
• ferulky zůstávají trvale fixovány na koloně a nepřilnou k matici
• žádná kontaminace z materiálu Vespel nebo grafit - 100% kov
• ideální pro vysokotlaké aplikace (fast GC)
• vhodné pro připojení k injektorům
• maximální teplota >500°C

Obu 1. Stopy vzduchu v MS systému po 5 teplotních cyklech při použití ferulek Vespel/grafit.

Obr 2. MS spektrum po 5 teplotních cyklech při použití ferulek Siltite. (U MS, nejsou přítomny netěsnosti dokonce i po 400 teplotních cyklech 70ºC a 400ºC).

Vylepšení těsnění u injektorů GC Agilent

Těsnění injektoru GC Agelint nevyžadující podložku má výrazně vyšší těsnost než originální díl výrobce a je sním mnohem jednodušší manipulace.

• zabraňuje permeaci kyslíku do nosného plynu a tím prodlužuje životnost kolony
• o-kroužek (Vespel^®) na okraji disku výrazně usnadňuje utahování a nevyžaduje použití velké síly
• o-kroužek (Vespel^®) na spodní části disku eliminuje nutnost použití podložky (jednodušší instalace).

Split/splitless injektor v plynových chromatografech Agilent obsahuje ve spodní části kovové těsnění, které se obtížně vyměňuje a nevykazuje dokonalou těsnost (spojení kov-kov). I při dotažení velkou silou vykazuje spojení kov-kov poměrně velké netěsnosti, obzvláště pak, použije-li se těsnění opakovaně. To má za následek pronikání atmosférického kyslíku do nosného plynu a pozvolnou degradaci stacionární fáze instalované GC kolony.

Porovnání těsnosti originálního těsnění Agilent s těsněním Restek

Patentované těsnění Dual Vespel^® Ring Inlet Seal (Restek) výrazně zvyšuje těsnost injektoru i po opakovaných teplotních cyklech bez nutnosti opětovného dotahování matice. Těsnění zajišťují dva o-kroužky z materiálu Vespel^® – jeden je umístěný na horní straně disku, druhý na jeho spodní části. Tyto o-kroužky eliminují nutnost použití podložky a usnadňují dotahování matice, která disk drží (nyní nutná velká síla pro její dotažení). Testy těsnosti na únik helia prokázali dokonakou těsnost i při lehkém dotažení těsnění.

Varianty těsnění

• nerezové
• pozlacené
• s deaktivací Siltek

Výběr vhodného septa pro GC

GC Agilent

GC DANI

GC Perkin-Elmer

GC Shimadzu

GC Varian

GC Thermo Scientific

Mikrostříkačky

Čištění mikrostříkaček a jejich údržba

Chromatografické stříkačky jsou velmi přesné a kvalitní dávkovače mikrolitrových množství kapalin. Přesto se jedná o výrobky, o které je potřeba se dobře starat. Tím zajistíte jejich dlouhou životnost a zkvalitníte dávkování vašich vzorků do chromatografů.

Některá rozpouštědla, jako např. halogenované uhlovodíky, mohou poškodit vysoce odolné lepidlo (cementované části) fixující jehlu k tělu mikrostříkačky. To může vést k zatuhnutí pístu nebo ucpání jehly.

Čištění skleněného těla stříkačky

Stříkačky Hamilton a SGE je nejlepší čistit rozpouštědlem se známou solvatační schopností, aby se nejlépe odstranily zbytky vzorků. Při čištění upřednostněte rozpouštědla neobsahující alkálické sloučeniny, fosfáty nebo detergenty. Hamilton nabízí čistící roztok schopný biodegradace (katalogové číslo 18311).

Stříkačku (vnitřní prostor skleněného těla) opláchněte nejprve deionizovanou vodou, acetonem nebo jiným rozpouštědlem rozpustným ve vodě (např. metanolem). Následně opláchněte stříkačku hexanem a vysušte. Vyvarujte se dlouhodobého ponoření stříkačky v čistícím roztoku.

Stříkačky MICROLITER™ (řada 600, 700, 800 a 900)

• Opláchněte stříkačku rozpouštědlem, které nejlépe rozpouští rezidua vzorku.
• Vyjměte píst z těla stříkačky a jemně ho otřete hadříkem, který neuvolňuje vlákna (ideální je hadřík namočený ve zvoleném rozpouštědle). vložte píst zpět do těla stříkačky a nasajte/vypusťte několikrát za sebou deionizovanou vodu. Postup opakujte s acetonem nebo metanolem a nakonec hexanem nebo obdobným nepolárním rozpouštědlem.
• Stříkačku vysušte.
• Pracujete-li s roztoky solí, doporučujeme skladovat stříkačku s vytáhnutým pístem.

Stříkačky GASTIGHT® (řada 1000, 1700 a 1800)

• Opláchněte stříkačku rozpouštědlem, které nejlépe rozpouští rezidua vzorku.
• Vyjměte píst z těla stříkačky a jemně ho otřete hadříkem, který neuvolňuje vlákna (ideální je hadřík namočený ve zvoleném rozpouštědle). vložte píst zpět do těla stříkačky a nasajte/vypusťte několikrát za sebou deionizovanou vodu. Postup opakujte s acetonem nebo metanolem a nakonec hexanem nebo obdobným nepolárním rozpouštědlem.
• Stříkačku vysušte.
• Pracujete-li s roztoky solí, doporučujeme skladovat stříkačku s vytáhnutým pístem

Skladování stříkaček

Stříkačky doporučujeme skladovat v originálním obalu. Ten je dokonale chrání a navíc vám poskytuje informaci o typu stříkačky.

Termální desporce

V této sekci jsme pro Vás připravili informace důležité při práci s termální desorpcí. Jedná se o poměrně náročnou analytickou techniku, pře které Vám tyto informace usnadní práci. Pokud zde hledané informace nenajdete, kontaktujte naše specialisty.

Parametry sorbentů

Měření emisí materiálů

Skladování a transport sorpčních trubiček

Kolony ChromShell a rozpouštědla

Při používání HPLC kolon ChromShell^® je zapotřebí vzít v úvahu několik důležitých charakteristik, které mají organická rozpouštědla používaná v mobilní fázi. Viskozita je nejdůležitějším parametrem, protože rozpouštědla s vysokou viskozitou jsou příčinou zvýšení protitlaku v HPLC systému. Dalšími důležitými parametry jsou "UV cutoff", index polarity a cena. Rozpouštědla s vysokým parametrem "UV cutoff" zhoršují citlivost v UV/Vis detektorech a rozpouštědla s nízkou polaritou způsobují rychlejší eluci organických sloučenin a jsou hodně používána pro čištění nebo regeneraci kolon.

Acetonitril

je pravděpodobně nejlepší organické rozpouštědlo používané ve směsi s vodou jelikož poskytuje nejnižší protitlak v HPLC systémech. Současně má velmi nízký "UV cutoff" a tedy výbornou citlivost v UV/Vis detektorech. Největší nevýhodou je jeho cena, která se v poslední době výrazně zvýšila.

Metanol

je další velmi oblíbené rozpouštědlo, které má podobnou eluční sílu jako acetonitril, má relativně nízkou absorbanci v UV oblasti a je mnohem levnější než acetonitril. Hlavní nevýhodou metanolu při jeho používání s HPLC kolonami s malou velikostí částic je tvorba vyššího protitlaku, který může přesáhnout limit HPLC přístroje.

Aceton

je méně používané rozpouštědlo díky vysoké absorbanci v UV oblasti. Někdy se využívá při analýzách sloučenin absorbujících při vyšších vlnových délkách nebo ve spojení s jinými typy detektorů, např. MS.

Etanol

není běžně doporučován pro používání s HPLC. Ve směsi s vodou způsobuje vysoký protitlak.

Iso-, n-propanol

mají relativně silnou eluční sílu a jsou většinou používána pro čištění kolon při nízkých průtocích, protože také generují vysoký protitlak.

Tetrahydrofuran

má podobnou eluční sílu jako n-propanol, ale díky vyšší ceně je používán méně často.

Deaktivace skla

Deaktivace skla pomocí DMDCS

Dimetyldichlorsilan (DMDCS) reaguje s aktivními hydroxylovými skupinami přítomnými na povrchu skla a tím vytváří deaktivovanou plochu. Tento postup zajustí inertní skleněné nádobí určené především pro citlivé sloučeniny.

Postup

V průběhu deaktivace se vyvíjí chlorovodík (HCl). Proto je nutné provádět deaktivaci v digestoři.

• K deaktivaci použijte 5% roztok DMDCS v toluenu. Roztok můžete připravit rozpuštěním 20 ml DMDCS v 400 ml toluenu. Roztok uchovávejte v tmavé skleněné nádobě při laboratorní teplotě.
• Ponořte skleněné nádobé určené k deaktivaci do 5% roztoku DMDCS na dobu 15 až 30 minut.
• Opláchněte sklo dvakrát toluenem.
• Ponořte sklo do metanolu na dobu 15 minut.
• opláchněte sklo metanolem.
• Vysušte sklo čistým dusíkem (bez vlhkosti a uhlovodíků).

Nastavení lineární rychlosti

Lineární rychlost je důležitý parametr v chromatografii, který má velký vliv na separační účinnost. Proto je důležité při vývoji metod stanovení mrtvého objemu a času.

Měření lineární rychlosti v GC

Mrtvý čas se stanoví nástřikem 2 µl sloučeniny, která nemá na chromatografické koloně retenci a je detekovatelná použitým detektorem. Plynotěsnou stříkačkou odeberte plyn nebo parní fázi sloučeniny a nadávkujte ji do chromatografu. Přesně změřte čas nástřiku a čas eluce, ze kterého se stanoví mrtvý čas.

Poznámka: Některé sloučeniny mohou mít nepatrnou retenci na kolonách se silným filmem, která je však pro podobné typy kolon reprodukovatelná.