Chromatografie

Vlastnosti

• V zásadě vhodný pro jakékoli matrice (moč, krevní sérum, slzy, mozková tekutina, tkáňové extrakty, půdní extrakty atd.)
• Snadná příprava vzorku
• Derivatizace a analýza vzorků do 20 minut
• Široké portfolio analytů (75) s možností dalšího rozšíření
• Není potřeba žádné zahřívání/zmrazování vzorku
• K dispozici knihovna NIST pro GC/MS
• Lze určit látky s nízkou molekulovou hmotností, které mohou být degradovány v iontovém zdroji (např. GLY, ALA atd.)
• Vhodné pro analýzu obtížně kvantifikovatelných látek, jako jsou polyaminy
• Součástí jsou všechna potřebná činidla, příslušenství, HPLC kolona a návod pro derivatizaci a analýzu s vysokou přesností a citlivostí

Přípustné úpravy metod HPLC

V této technické poznámce jsou uvedeny HPLC kolony Chromservis odpovídající USP metodám a rozsah, v jakém lze různé parametry chromatografického testu upravit bez zásadních změn lékopisných analytických postupů. Jiné než uvedené změny vyžadují revalidaci postupu.

Dávkování vzorku ve Flash chromatografii

Kapalné nebo pevné vzorky s malým nebo velkým objemem - protože jsou vaše vzorky rozmanité, nabízíme několik možností dávkování na kolonu, abychom zaručili co možná nejlepší výsledky.

"Dry load"

K dispozici jsou jednorázové plastové vyrianty "Dry load" kolonek nebo kolonky ve verzi z nerezové oceli. Ty jsou opakovaně použitelné a mají také výhodu větší odolnosti vůči vyššímu tlaku.
S nerezovou kolonkou "Dry load" můžete provádět nástřiky pevných látek na preparativní kolonu nebo na flash kolonky, kde by maximální tlaková odolnost plastové kolnonky byla nedostatečná.

Dávkovací smyčky

Naše řada dávkovacích smyček nabízí objemy od 100 μL do 50 mL, takže vyhovíme všem vašim potřebám.

Autosampler

Automatizujte dávkování vzorku pomocí našeho autosampleru a zvyšte svůj výkon desetinásobně. PuriFlash^® AS-1 umožňuje dávkování vzorků od 50 µL do 500 mL s automatickým čištěním používaných zkumavek mezi každým nástřikem.

Dávkování vzorku zajišťuje sekvence softwaru InterSoft . Autosampler může být vybavený 6-cestným nebo 10-cestným elektrickým ventilem.

Platforma autosampleru má možnosti použití stojánku pro zkumavky nebo láhve až do objemu 250 mL, případně použití stojanů na míru.

Dávkovací čerpadlo

Máte-li veliké objemy vzorku, které potřebujete dávkovat na Flash nebo preparativní kolonu, stačí použít naše čerpadlo a poté spustit metodu. Je to tak snadné!

JAK SPRÁVNĚ UZAVÍRAT KRIMPOVACÍ VIALKY

Krimpovací vialky jsou výbornou vzorkovnicí pro automatické dávkovače plynových a kapalinových chromatografů a pro skladování vzorků nebo kalibračních roztoků. Technika jejich uzavírání je velmi důležitá pro správnou těsnost. Díky netěsnosti způsobené nesprávným uzavřením, může dojít k odpaření rozpouštědla nebo ke ztrátě analytů.
Správně uzavřená vialka se pozná podle toho, že se její víčko po uzavření protáčí ztěžka a septum je rovné.
Vialka, která je uzavřená příliš velkou silou se pozná podle toho, že jejím víčkem nelze zpravidla vůbec otáčet a navíc má prohnuté septum (směrem dovnitř). Dojde-li k propíchnutí septa jehlou mikrostříkačky, dojde k velkému namáhání septa a tím k narušení těsnosti vialky.
Vialka, která nemá správně uzavřené víčko, díky malé síle krimpovacích kleští, se projevuje snadným otáčením víčka a v některých případech i neobepnutým hliníkovým materiálem kolem spodního okraje límce vialky.
Správnou sílu uzavíracích kleští můžete nastavit.
U starších typů kleští se nastavení síly provádí otáčením imbusového klíče uvnitř čelistí. Kleště mívají i dorazový šroub, kterým se nastavuje bezpečnostní vzdálenost, aby nedošlo k použití příliš vysoké síly a tím k netěsnosti nebo dokonce k mechanickému poškození vialky.

Chromatogramy

Obr. 1: Chromatogram vnitřních standardů, SD1 a SD2. Separace 5 nmol aminokyselin pomocí LC-MS MetAmino^®

Obr. 2: Chromatogram reálného vzorku: Separace aminokyselin ve vzorku piva Budvar 12˚ (25 µl vzorku bylo nastříknuto na kolonu). Vysoká účinnost naší kolony a vysoké rozlišení přispívají k pěkné separaci píků. Vzorek testován pomocí LC-MS MetAmino^®

Obr. 3: Chromatogram reálného vzorku: Separace aminokyselin přítomných v krevním séru (25 µL vysráženého séra bylo nastříknuto na kolonu). Vysoká účinnost naší kolony a vysoké rozlišení přispívají k pěkné separaci píků. Vzorek testován pomocí LC-MS MetAmino^®

Příprava vzorků

Níže je uvedený stručný postup přípravy vzorku. Podrobný postup naleznete v uživatelské příručce MetAmino^®.

Příprava vzorku pro LC-MS analýzu probíhá následovně:

1. Napipetujte 100 μl vašeho vzorku (sérum, plazma, ...) do centrifugační zkumavky a přidejte 100 μL precipitačního média. Centrifugujte 30 až 60 sekund při 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
2. Napipetujte 25 μl vašeho vysráženého vzorku do nové centrifugační zkumavky a přidejte 10 μl roztoku s vnitřními standardy.
3. Napipetujte 20 μl katalytického roztoku a 5-10 sekund vortexujte.
4. Napipetujte 10 μl reagenčního (derivatizačního) činidla a vortexujte 5-10 sekund. Nechte derivatizaci probíhat alespoň 2-3 minuty.
5. Aktivujte a ekvilibrujte sorbent v MSPE filtru přidáním:
   1. 200 μl aktivačního média sorbentu MSPE, poté centrifugujte 30 až 60 sekund při 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
   2. 200 μl ekvilibračního média sorbentu MSPE, poté centrifugujte 30 až 60 sekund při 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
6. Vylijte eluát prošlý membránou.
7. Derivatizační reakční směs nařeďte 400 μl ředícího a promývacího média a vortexujte 5-10 sekund.
8. Zředěnou reakční směs (typicky 450-500 μl) napipetujte na aktivovaný a naekvilibrovaný MSPE filtr a nechte 1-2 minuty stát. Centrifugujte 30 až 60 sekund při 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
9. Vylijte eluát prošlý membránou.
10. Promyjte sorbent v MSPE filtru 200 μl ředícího a promývacího média a centrifugujte 30 až 60 sekund při 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
11. Umístěte MSPE filtr do nové centrifugační zkumavky, přidejte 200 μl elučního média a centrifugujte 30 až 60 sekund při 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
12. Přeneste eluát do nové vialky a umýstěte jej do autosampleru. Vzorek je připraven pro LC-MS analýzu.

Příprava vzorku pro GC-MS analýzu probíhá následovně:

1. Do reakční skleněné zkumavky napipetujte 25 μl vzorku a 10 μl roztoku s vnitřními standardy.
2. Do reakční skleněné zkumavky napipetujte 20 μl redukčního činidla a krátce, 5 až 10 sekund, vortexujte. Nechte 1 až 2 minuty odstát.
3. Do reakční skleněné zkumavky napipetujte 25 μl základního roztoku.
4. Potom přidejte 50 μl reagenčního (derivatizačního) činidla a vortexujte 5 až 10 sekund.
5. Napipetujte 25 μl katalytického roztoku do reakční skleněné zkumavky a 5 až 10 sekund vortexujte.
6. Znovu napipetujte 25 μl katalytického roztoku do reakční skleněné zkumavky a 5 až 10 sekund vortexujte. Nechte 1-2 minuty odstát. Emulze se postupně rozdělí na dvě vrstvy.
7. Napipetujte 50 μl extrakčního média do reakční skleněné zkumavky a 5 až 10 sekund vortexujte.
8. Napipetujte 25 μl kyselého média do reakční skleněné zkumavky a 5 až 10 sekund vortexujte. Poté centrifugujte 30 až 60 sekund 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
9. Přeneste organickou (horní) vrstvu (50-100 µL) do autosamplerové vialky s insertem. Vzorek je připraven pro analýzu GC-MS.

Obsah sady

MetAmino^® kit obsahuje všechna činidla, média a chemikálie. Obsah startovací sady je uveden v tabulkách níže:

Obsah soupravy LC-MS pro 100 vzorků:

Obsah soupravy GC-MS pro 100 vzorků:

Popis

Naše sady MetAmino^® LC-MS a GC-MS poskytují rychlou, robustní, reprodukovatelnou a precizní metodu pro analýzu aminokyselin, která zahrnuje jak přípravu vzorků, tak i chromatografickou separaci.

Metoda využívající LC-MS je založena na mikro-extrakci na pevné fázi využívající speciální mikrospin filtry (MSPE) s nově vyvinutým sorbentem a integrovanou membránou 0,22 µm, metoda GC-MS využívá pro přípravu mikroextrakci kapalina-kapalina (LLME). Po této předúpravě je vzorek analyzován v LC-MS (GC-MS). Celkově trvá příprava vzorku pro LC-MS asi 8 minut a analýza vzorku 12 minut, takže celá doba experimentu je pouhých 20 minut. Celková doba experimentu GC-MS je dokonce kratší – zhruba 17 minut.

Tato jedinečná sada splňuje všechny požadavky laboratoří a je navržena pro všechny koncové uživatele, kteří hledají jednoduchou analytickou metodu a vysokou účinnost separace.

Přehled sorbentů MSPE

Sorbenty pro techniku MSPE jsou zvoleny tak, aby pokryly co nejširší pole aplikací. MSPE SpeExtra C18 je hydrofóbní typ oktadecyl silikagelu se speciálním endcappingem s velmi širokým uplatněním. Je vhodný pro celou řadu analytů, horší retenci vykazuje pro polární sloučeniny. MSPE SpeExtra C18-P je polárně modifikovaný monomerní oktadecyl silikagel . Nabízí různé typy interakcí: dipól-dipól, π- π a hydrofóbní. Je tedy vhodný pro aromatické a polární sloučeniny. MSPE SpeExtra HLB polymerní sorbent s vysokým měrným povrchem a speciálním endcappingem. Má hydrofilní a lipofilní modifikaci zajišťující univerzální použití a vyšší kapacitu než C18 silikagel. MSPE SpeExtra WAX je polymerní sorbent na bázi PS/DVB se speciálním end-cappingem a vysoce specifickým povrchem, který se připravuje kopolymerací styrenu a divinylbenzenu, přičemž vytváří slabé aniontové interakce.

Čištění a testování konopí

Konopí obsahuje stovky kanabinoidů, přičemž kanabidiol (CBD) je v rostlině nejrozšířenější a Δ 9-Tetrahydrocannabinol (THC) je aktivní složkou způsobující psychotropní účinky. Existuje však mnohem více sloučenin, které jsou vytvářeny rostlinou konopí a byly zkoumány pro jejich lékařské účinky. Tento limit často vyžaduje úpravu destilovaného konopného extraktu (odstranění THC z výchozího extraktu) a lze ji dosáhnout pomocí preparativní chromatografie, např. pomocí systému puriFlash^® XL-Cannabis. HPLC analýza výchozího materiálu (destilátu), frakcí shromážděných během procesu čištění a konečného produktu může být provedena analytickým systémem Advion AVANT HPLC-UV. Jak čištění, tak analytické metody jsou uvedeny v této božuře a tvoří kompletní řešení pro odstranění THC v konopném průmyslu.

• přístroj puriFlah^® L-Canabis s výkonem až 4,3 kg/den (kolony do 15 cm ID)
• nástroj puriFlah^® XL-Canabis s výkonem až 12,2 kg/den (kolony do 20 cm ID)
• Plate Express TLC čtečka destiček