| Aditivum | UV cutoff (nm) |
| Kyselina octová, 1% | 230 |
| Octan amonný, 10 mM | 205 |
| Uhličitan amonný, 10 mM | 190 |
| Hydrogenfosforečnan amonný, 50 mM | 205 |
| CAPS 3-(cyklohexylamino)ethansulfonová kyselina, 0,1 % | 215 |
| EDTA, 1 mM | 190 |
| Kyselina chlorovodíková, 0,1 % | 190 |
| Hydrogenfosforečnan vápenatý, 10 mM | 190 |
| Hydrogenfosforečnan vápenatý, 10 mM | 190 |
| MES 2-(N-morfolino)ethansulfonová kyselina, pH 6,0, 10 mM | 215 |
| Octan sodný, 10 mM | 205 |
| Citrát sodný, 10 mM | 225 |
| Dodecylsulfát sodný, 10 mM | 190 |
| Formiát sodný, 10 mM | 200 |
| Natrium-hexansulfonová kyselina, 5 mM | 225 |
| TEA, (triethylamin), 1% | 235 |
| TFA (kyselina trifluoroctová), 0,1 % | 190 |
| Tetrabutylamonium dihydrogenfosfát, 5 mM | 200 |
| TRIS HCl (Tris(hydroxylmethyl)aminomethan), pH 7,0, 20 mM | 202 |
| TRIS HCl (Tris(hydroxylmethyl)aminomethan), pH 8,0, 20 mM | 212 |
On-line přepočty jednotek:
| Velikost částic (µm) | ID (mm) | Průtok (ml/min) | Tlak 150 mm* (PSI) | Tlak 250 mm* (PSI) |
| 3 | 4,6 | 0,5 – 1,0 | 1000 | 1500 |
| 5 | 3,0 | 0,4 – 0,8 | 750 | 1250 |
| 5 | 4,6 | 1,0 - 2,0 | 700 | 1100 |
| 5 | 10,0 | 5,0 – 10,0 | 750 | 1250 |
| 10 | 4,6 | 2,0 – 5,0 | 400 | 600 |
| 10 | 10,0 | 10,0 – 20,0 | 500 | 800 |
| 10 | 21,2 | 20,0 – 40,0 | 300 | 500 |
* Při průtoku na dolních hranicích doporučených průtoků
| ID | Průtok | Barva | OD |
| 0,13 mm | Až 2,0 ml/min | Červené | 1/16" |
| 0,18 mm | Až 5,0 ml/min | Žlutá | 1/16" |
| 0,25 mm | Až 20 ml/min | Modrý | 1/16" |
| 0,50 mm | Až 50 ml/min | oranžový | 1/16" |
| 0,75 mm | Až 100 ml/min | Zelená | 1/16" |
| 1,0 mm | Až 200 ml/min | Šedá | 1/16" |
| 1,59 mm | Až 500 ml/min | 1/8"". | |
| 2,40 mm | Až 1000 ml/min | 1/8"". |
Palce na mm – palec x 25,4 = mm
Stopy na metr – stopy x 0,3048 = metr
Tlak na koloně při průtoku 1 ml/min
P = 2,1 x d x 10,13 x h / h 2 x vp 2
P – tlak (MPa)
L – délka kolony v mm
h - dynamická viskozita (pro vodu = 1)
d – vnitřní průměr kolony v mm
vp – velikost částic v µm
Tlak na koloně 4,6 x 250 mm, 5 um bude při průtoku 1,0 ml/min cca 100 bar
| ID (mm) | Hodnota nástřiku (µl) | Kapacita kolony (mg) | Průtok (ml/min) |
| 4,6 | 5-100 | 1 | 0,5 – 2,0 |
| 10 | 100–1000 | 5 | 4,0 – 15,0 |
| 21,2 | 1000–5000 | 20 | 10 – 50 |
| 30 | 2000 – 10 000 | 40 | 40 – 100 |
| 50 | 5000 – 20 000 | 120 | 100–300 |
| 100 | 10 000 – 50 000 | 500 | 400–1000 |
pKa kyselých a zásaditých pufrů v HPLC pro přípravu mobilní fáze
| Kyselý pufr | Teplota (°C) | pK 1 | pK 2 | pK 3 | |
| ACES 2-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]ethansulfonová kyselina | 20 | 6.9 | - | - | |
| Octová kyselina | 25 | 4.8 | - | - | |
| Kyselina boritá | 20 | 9.1 | 12.7 | 13.8 | |
| CAPS 3-(cyklohexylamino)ethansulfonová kyselina | 20 | 10.4 | - | - | |
| Kyselina citronová | 25 | 3.1 | 4.8 | 6.4 | |
| Kyselina mravenčí | 20 | 3.8 | - | - | |
| Glycin | 25 | 2.3 | 9.6 | - | |
| Glycylglycin | 20 | 8.4 | - | - | |
| HEPES N-2-hydroxyethylpiperazin-N'-2-ethansulfonová kyselina | 20 | 7.6 | - | - | |
| Imidazol | 20 | 7,0 | - | - | |
| MES 2-(N-morfolino)ethansulfonová kyselina | 20 | 6.2 | - | - | |
| MOPS 3-(N-morfolino)propansulfonová kyselina | 20 | 7.2 | - | - | |
| Kyselina šťavelová | 25 | 1.3 | 4.3 | - | |
| Kyselina fosforečná | 25 | 2.1 | 7.2 | 12.7 | |
| TES 2-[tris(hydroxymethyl)methyl]aminoethansulfonová kyselina | 20 | 7.5 | - | - | |
| Kyselina trifluoroctová | 25 | 0,3 | - | - | |
| Tricin N-[tris(hydroxymethyl)methyl]glycin | 20 | 8.2 | - | - | |
| TRIS Tris(hydroxylmethyl)aminomethan | 20 | 8.3 | - | - | |
| pKb bází při HPLC pro přípravu mobilní fáze | |||||
| Zásaditý pufr | teplota (°C) | pK 1 | pK 2 | pK 3 | |
| Amoniak | 25 | 9.3 | - | - | |
| Diethylamin | 20 | 11.1 | - | - | |
| dimethylamin | 25 | 10.7 | - | - | |
| Ethylamin | 20 | 10.8 | - | - | |
| Ethylendiamin | 20 | 10.1 | 7,0 | - | |
| methylamin | 25 | 10.7 | - | - | |
| Morfolin | 25 | 8.3 | - | - | |
| triethylamin (TEA) | 18 | 11.0 | - | - | |
| trimethylamin | 25 | 9.8 | - | - | |
Pozn: Rozmezí pH, pro které je vhodný vhodný je v rozsahu pK ± 1. Je třeba vzít v úvahu UV Cutoff použitého pufru (tab. 2)
| % vody | viskozita (MeOH/voda) | viskozita (AcCN/voda) |
|---|---|---|
| 0 | 0.65 | 0.35 |
| 10 | 0.95 | 0.50 |
| 20 | 1.20 | 0.55 |
| 30 | 1.60 | 0.70 |
| 40 | 1.75 | 0.80 |
| 50 | 1.90 | 0.90 |
| 60 | 1.80 | 1.00 |
| 70 | 1.75 | 1.05 |
| 80 | 1.65 | 1.10 |
| 90 | 1.40 | 1.05 |
| 100 | 1.00 | 1.00 |
Volba kapiláry pro různé průtoky
Výběr kolony v závislosti na velikosti nástřiku a kapacitě kolony
UV cutoff aditiv mobilních fází
pKa kyselých pufrů v mobilních fázích pro HPLC
pKb bází v mobilních fázích pro HPLC
Přepočty jednotek tlaku
Odhad tlaku na kolonách v závislosti na velikosti částic, průměru a délce kolony
Vlastnosti rozpouštědel