Phone +420 274 021 211
O nas
Kontakt
PL
Szukaj
0 Porównywać
Dodaj produkty do porównania za pomocą ikony wagi, a następnie porównaj ich parametry.
Użytkownik
0 Kosz
Twój koszyk jest pusty...
MENU
  1. Chromservis
  2. Chromatography
Kategoria
Błyskawiczna i preparatywna HPLCFazy stacjonarneGC/MS-TOF
    GC/MS/MS
      Konwersje jednostekMetAmino kitPorady i wskazówkiSłowniczek
        UHPLCСпринцовки

        Chromatografia

        Właściwości rozpuszczalników

        Rozpuszczalnik Indeks polaryzacji Współczynnik załamania światła (20°C)

        Odcięcie UV (nm)

        (1 PLN)

        		 Temperatura wrzenia (°C)

        Lepkość

        (mPa.s; 20 °C)

        		 Mieszalność z wodą
        Kwas octowy 6,2 1,372 230 118 1,26 100
        Aceton 5.1 1359 330 56 0,32 100
        Acetonitryl 5,8 1,344 190 82 0,37 100
        Benzen 2,7 1501 280 80 0,65 0,18
        Octan butylu 4.0 1,094 254 125 0,73 0,43
        n-butanol 3,9 1,399 215 118 2,98 7,81
        Tetrachlorek węgla 1,6 1466 263 77 0,97 0,08
        Chloroform 4.1 1466 245 61 0,57 0,815
        Cykloheksan 0,2 1426 200 81 1,00 0,01
        Chlorek etylenu 3,5 1,444 225 84 0,79 0,81
        Chlorek metylenu 3.1 1424 235 41 0,44 1,6
        Dimetyloformamid 6,4 1,431 268 155 0,92 100
        Dimetylosulfotlenek 7,2 1478 268 189 2.00 100
        Dioksan 4,8 1422 215 101 1,54 100
        Octan etylu 4.4 1,372 260 77 0,45 8,7
        Etanol 5.2 1360 210 78 1,20 100
        Eter dietylowy 2,8 1,353 220 35 0,32 6,89
        Heptan 0.0 1,387 200 98 0,39 0,0003
        Heksan 0.0 1,375 200 69 0,33 0,001
        Metanol 5.1 1,329 205 65 0,60 100
        Eter metylobutylowy 2,5 1,369 210 55 0,27 4,8
        Keton metylowo-etylowy 4,7 1,379 329 80 0,45 24
        Pentan 0.0 1,358 200 36 0,23 0,004
        n-Propanol 4.0 1,384 210 97 2,27 100
        izoPropanol 3,9 1,377 210 82 2.30 100
        Eter diizopropylowy 2.2 1,368 220 68 0,37
        Tetrahydrofuran 4.0 1407 215 65 0,55 100
        Toluen 2,4 1496 285 111 0,59 0,051
        Trichloroetylen 1,0 1477 273 87 0,57 0,11
        Woda 9,0 1,333 200 100 1,00 100
        Ksylen 2,5 1500 290 139 0,61 0,018

        Zależność lepkości mieszaniny rozpuszczalników od jej składu procentowego

        % Z wody Lepkość (MeOH/woda) Lepkość (ACN/woda)
        0 0,65 0,35
        10 0,95 0,50
        20 1,20 0,55
        30 1,60 0,70
        40 1,75 0,80
        50 1,90 0,90
        60 1.80 1,00
        70 1,75 1,05
        80 1,65 1.10
        90 1,40 1,05
        100 1,00 1,00

        Wykres

        Szacowanie ciśnienia na kolumnach HPLC w zależności od wielkości cząstek, średnicy i długości kolumny

        Wielkość cząstek (µm) ID (mm) Przepływ (ml/min)

        Nacisk 150mm* (PSI)

        Nacisk 250mm* (PSI)
        3 4,6 0,5 – 1,0 1000 1500
        5 3,0 0,4 – 0,8 750 1250
        5 4,6 1,0 - 2,0 700 1100
        5 10,0 5,0 - 10,0 750 1250
        10 4,6 2,0 - 5,0 400 600
        10 10,0 10,0 - 20,0 500 800
        10 21,2 20,0 - 40,0 300 500

        * Gdy natężenie przepływu mieści się w dolnych granicach zalecanych natężenia przepływu

        Wybór kapilar dla różnych prędkości przepływu

        ID Pływ Kolor Z
        0,13 mm Do 2,0 ml/min Czerwony 1/16"
        0,18 mm Do 5,0 ml/min Żółty 1/16"
        0,25 mm Do 20 ml/min Niebieski 1/16"
        0,50 mm Do 50 ml/min Pomarańczowy 1/16"
        0,75 mm Do 100 ml/min Zielony 1/16"
        1,0 mm Do 200 ml/min Szary 1/16"
        1,59 mm Do 500 ml/min 1/8"".
        2,40 mm Do 1000 ml/min 1/8"".

        Cale do mm - cale x 25,4 = mm

        Stopy na metr - stopy x 0,3048 = metr

        Ciśnienie w kolumnie przy szybkości przepływu 1 ml/min

        P = 2,1 xdx 10,13 xh / h 2 x vp 2

        P – ciśnienie (MPa)
        L – długość kolumny w mm
        h - lepkość dynamiczna (dla wody = 1)
        d – średnica wewnętrzna kolumny w mm
        vp – wielkość cząstek w µm

        Ciśnienie na kolumnie 4,6 x 250 mm, 5 um wyniesie ok. 100 barów przy szybkości przepływu 1,0 ml/min

        Wybór kolumny w zależności od wielkości wtrysku i jego wydajności

        ID (mm) Wartość wtrysku (µl)

        Pojemność kolumny (mg)

        		 Przepływ (ml/min)
        4,6 5-100 1 0,5 - 2,0
        10 100-1000 5 4,0 - 15,0
        21,2 1000-5000 20 10 – 50
        30 2000 – 10 000 40 40 – 100
        50 5000 – 20 000 120 100-300
        100 10 000 – 50 000 500 400–1000

        pK kwasów i zasad stosowanych jako dodatek do faz ruchomych HPLC

        pK oraz bufory kwasowe i zasadowe w HPLC do przygotowania fazy ruchomej

        Bufor kwasowy Temperatura (°C) pK 1 pK 2 pK 3
        ACES kwas 2-[(2-amino-2-oksoetylo)amino]etanosulfonowy 20 6,9 - -
        Kwas octowy 25 4,8 - -
        Kwas borowy 20 9,1 12,7 13,8
        CAPS kwas 3-(cykloheksyloamino)etanosulfonowy 20 10,4 - -
        Kwas cytrynowy 25 3.1 4,8 6,4
        Kwas mrówkowy 20 3,8 - -
        Glicyna 25 2,3 9,6 -
        Glicyloglicyna 20 8.4 - -
        HEPES Kwas N-2-hydroksyetylopiperazyno-N'-2-etanosulfonowy 20 7,6 - -
        imidazol 20 7,0 - -
        MES Kwas 2-(N-morfolino)etanosulfonowy 20 6,2 - -
        MOPS kwas 3-(N-morfolino)propanosulfonowy 20 7,2 - -
        Kwas szczawiowy 25 1,3 4,3 -
        Kwas fosforowy 25 2,1 7,2 12,7
        TES kwas 2-[tris(hydroksymetylo)metylo]aminoetanosulfonowy 20 7,5 - -
        Kwas trifluorooctowy 25 0,3 - -
        Tricyna N-[tris(hydroksymetylo)metylo]glicyna 20 8,2 - -
        TRIS Tris(hydroksymetylo)aminometan 20 8,3 - -
        pKb zasad w HPLC do przygotowania fazy ruchomej
        Zaszczepiony bufor temperatura (°C) pK 1 pK 2 pK 3
        Amoniak 25 9,3 - -
        dietyloamina 20 11.1 - -
        dimetyloamina 25 10,7 - -
        Etyloamina 20 10,8 - -
        Etylenodiamina 20 10.1 7,0 -
        metyloamina 25 10,7 - -
        Morfolina 25 8,3 - -
        trietyloamina (TEA) 18 11,0 - -
        trimetyloamina 25 9,8 - -

        Uwaga: Zakres pH, dla którego jest odpowiedni, mieści się w zakresie pK ± 1. Należy wziąć pod uwagę wartość odcięcia UV stosowanego buforu (tabela 2)

        Zastosowanie i wsparcie w UHPLC

        Chronometr Transfer metody (od konwencjonalnej HPLC do UHPLC)

        Pojemność próbki (w jaki sposób mniejsze cząstki wpływają na pojemność próbki?)

        Transfer metod do UHPLC

        Przenoszenie metod z klasycznej HPLC do UHPLC wymaga najpierw optymalizacji selektywności i wydajności kolumny dla pożądanego zastosowania. Po zakończeniu tej części opracowania metody możemy przejść do przeniesienia metody do UHPLC. Aby to zrobić, będziemy mogli wykorzystać nieskomplikowane obliczenia, aby pomóc w ustaleniu równoważnych warunków separacji. Artykuł ten jest stopniowo opisywany.

        Obliczanie Wybór długości kolumny

        Pierwsze obliczenie określa odpowiednią długość kolumny chromatograficznej. Utrzymując długość kolumny i zmniejszając rozmiar cząstek, zwiększa się liczba teoretycznych łat na kolumnie. Dlatego możemy skrócić kolumnę bez utraty rozróżnienia. Stosując wzór 1 i wybierając odpowiednią długość kolumny, zachowamy ten sam rozdział jak dla HPLC z węzłem.

        Optymalizacja objętości wtrysku

        Po ustaleniu odpowiedniej długości kolumny możemy zoptymalizować objętość wtrysku. Poprzez zmniejszenie średnicy wewnętrznej i długości kolumny zmniejsza się całkowita objętość i pojemność próbki. Dlatego musimy dostosować objętość opryskiwania zgodnie ze wzorem 2 . W tym przypadku należy zdać sobie sprawę, że przez zmniejszenie całkowitej objętości kolumny bardzo ważne jest zapewnienie kompatybilności próbki rozpuszczalnika z kompozycją fazy ruchomej. W przeciwnym razie mogą wystąpić czasy retencji, wydajność, a nawet zmiana w selektywności.

        Obliczanie Ustawienie przepływu

        Natężenie przepływu musi być ustawione tak, aby zapewnić odpowiednią prędkość liniową dla mniejszej kolumny. Jest to zdefiniowane jako odległość osiągnięta przez fazę ruchomą przez jednostkę czasu (w przeciwieństwie do prędkości przepływu, która jest zdefiniowana jako objętość fazy ruchomej przechodzącej przez kolumnę chromatograficzną w czasie). Aby utrzymać taką samą prędkość liniową, która jest ważna dla utrzymania wydajności, natężenie przepływu fazy ruchomej musi zostać zmniejszone poprzez zmniejszenie średnicy kolumny. W przypadku separacji izokratycznej przepływ w kolumnie można obliczyć zgodnie ze wzorem 3 (należy również wziąć pod uwagę wielkość cząstek). Powinno to być szybkie i łatwe oszacowanie ustawienia natężenia przepływu dla równoważnej chromatografii. W tym miejscu należy zauważyć, że cząstki mniejsze niż 2 μm są mniej podatne na większe prędkości przepływu, a zatem można stosować większe szybkości przepływu w separacjach izokratycznych bez szkodliwego wpływu na skuteczność oddzielania.

        Ustawianie programu czasowego

        Na koniec, po zoptymalizowaniu długości kolumny, objętości oprysku i przepływu, możemy przejść do początku gradientu. Przenosząc metodę z konwencjonalnej HPLC do UHPLC, musimy jednocześnie dopasować interakcję gradientu do faz. Tutaj ustawiamy to za pomocą wzoru 4 .

        Literatura: Rick Lake, Restek Corporation

        Lepkość rozpuszczalników

        Zależność lepkości mieszanin rozpuszczalników od ich składu procentowego

        % wody lepkość (MeOH / woda) lepkość (AcCN / woda)
        0 0,65 0,35
        10 0,95 0,50
        20 1,20 0,55
        30 1,60 0,70
        40 1,75 0,80
        50 1,90 0,90
        60 1,80 1,00
        70 1,75 1,05
        80 1,65 1.10
        90 1,40 1,05
        100 1,00 1,00

        Wykresy do chromatografii

        Wybór kapilary dla różnych prędkości przepływu

        Dobór kolumny w zależności od wielkości natrysku i pojemności kolumny

        Dodatek odcięcia UV dla faz mobilnych

        pK i kwaśne bufory w fazach ruchomych do HPLC

        pks zasady w fazie ruchomej do HPLC

        Konwersja jednostek ciśnienia

        Oszacowanie ciśnienia na kolumnach, w zależności od wielkości cząstek, średnicy i długości kolumny

        Lepkość mieszanin rozpuszczalników

        Właściwości rozpuszczalnika