Хроматография

Свойства растворителей

Растворитель	Индекс полярности	Показатель преломления (20°C)	УФ (нм) отсечка (1 а.е.)	Температура кипения (°С)	Вязкость (мПа·с; 20 °C)	Смешиваемость с водой
Уксусная кислота	6.2	1372	230	118	1,26	100
Ацетон	5.1	1359	330	56	0,32	100
ацетонитрил	5,8	1344	190	82	0,37	100
Бензол	2,7	1501	280	80	0,65	0,18
Бутил ацетат	4.0	1094	254	125	0,73	0,43
н-бутанол	3,9	1399	215	118	2,98	7,81
Четыреххлористый углерод	1,6	1466	263	77	0,97	0,08
Хлороформ	4.1	1466	245	61	0,57	0,815
циклогексан	0,2	1426	200	81	1,00	0,01
Этиленхлорид	3,5	1444	225	84	0,79	0,81
Метиленхлорид	3.1	1424	235	41	0,44	1,6
Диметилформамид	6.4	1431	268	155	0,92	100
Диметилсульфоксид	7.2	1478	268	189	2.00	100
диоксан	4,8	1422	215	101	1,54	100
Ацетат этила	4.4	1372	260	77	0,45	8,7
Этиловый спирт	5.2	1360	210	78	1,20	100
Диэтиловый эфир	2,8	1353	220	35	0,32	6,89
Гептан	0,0	1387	200	98	0,39	0,0003
гексан	0,0	1375	200	69	0,33	0,001
Метанол	5.1	1329	205	65	0,60	100
Метилбутиловый эфир	2,5	1369	210	55	0,27	4,8
Метилэтилкетон	4.7	1379	329	80	0,45	24
пентан	0,0	1358	200	36	0,23	0,004
н-пропанол	4.0	1384	210	97	2,27	100
изопропанол	3,9	1377	210	82	2.30	100
диизопропиловый эфир	2.2	1368	220	68	0,37
Тетрагидрофуран	4.0	1407	215	65	0,55	100
Толуол	2,4	1496	285	111	0,59	0,051
Трихлорэтилен	1,0	1477	273	87	0,57	0,11
Вода	9,0	1333	200	100	1,00	100
ксилол	2,5	1500	290	139	0,61	0,018

Závislost viskozity směsi rozpouštědel na jejím procentuálním složení

% воды	Вязкость (МеОН/вода)	Вязкость (ACN/вода)
0	0,65	0,35
10	0,95	0,50
20	1,20	0,55
30	1,60	0,70
40	1,75	0,80
50	1,90	0,90
60	1,80	1,00
70	1,75	1,05
80	1,65	1,10
90	1,40	1,05
100	1,00	1,00

Граф

Оценка давления на колонках ВЭЖХ в зависимости от размера частиц, диаметра и длины колонки

Размер частиц (мкм)	ID (мм)	Поток (мл/мин)	Давление *150 мм (пси)**	Давление *250 мм (пси)**
3	4.6	0,5 – 1,0	1000	1500
5	3.0	0,4 – 0,8	750	1250
5	4.6	1,0 - 2,0	700	1100
5	10,0	5,0 - 10,0	750	1250
10	4.6	2,0–5,0	400	600
10	10,0	10,0 - 20,0	500	800
10	21,2	20,0 - 40,0	300	500

* Когда скорость потока находится на нижнем пределе рекомендуемых значений скорости потока

Выбор капилляров для различных скоростей потока

я бы	Поток	Цвет	ИЗ
0,13 мм	До 2,0 мл/мин	Красный	1/16"
0,18 мм	До 5,0 мл/мин	Желтый	1/16"
0,25 мм	До 20 мл/мин	Синий	1/16"
0,50 мм	До 50 мл/мин	апельсин	1/16"
0,75 мм	До 100 мл/мин	Зеленый	1/16"
1,0 мм	До 200 мл/мин	Серый	1/16"
1,59 мм	До 500 мл/мин		1/8 "".
2,40 мм	До 1000 мл/мин		1/8 "".

Дюймы в мм - дюйм x 25,4 = мм

Футы на метр - футы x 0,3048 = метр

Давление в колонке при скорости потока 1 мл/мин

Р = 2,1 хдх 10,13 хч /ч ² х вп ²

Р – давление (МПа)
L – длина колонны в мм
h - динамическая вязкость (для воды = 1)
d – внутренний диаметр колонны в мм
vp – размер частиц в мкм

Давление на колонке 4,6 x 250 мм, 5 мкм будет составлять примерно 100 бар при скорости потока 1,0 мл/мин.

Выбор колонки в зависимости от размера впрыска и ее производительности

ID (мм)	Значение впрыска (мкл)	Емкость колонки (мг)	Поток (мл/мин)
4.6	5-100	1	0,5 - 2,0
10	100-1000	5	4,0 - 15,0
21,2	1000-5000	20	10 – 50
30	2000 – 10 000	40	40 – 100
50	5 000 – 20 000	120	100-300
100	10 000 – 50 000	500	400–1000

pK kyselin a zásad používaných jako aditivum pro mobilní fáze HPLC

pK _a кислых буферов при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы

буфер	Температура (°С)	ПК ₁	ПК ₂		ПК ₃
ACES 2-[(2-амино-2-оксоэтил)амино]этансульфоновая кислота	20	6,9	-		-
Уксусная кислота	25	4,8	-		-
Борная кислота	20	9.1	12,7		13,8
CAPS 3-(циклогексиламино)этансульфокислота	20	10.4	-		-
Лимонная кислота	25	3.1	4,8		6.4
Муравьиная кислота	20	3,8	-		-
Глицин	25	2.3	9,6		-
Глицилглицин	20	8.4	-		-
HEPES N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота	20	7.6	-		-
имидазол	20	7,0	-		-
МЭС 2-(N-морфолино)этансульфокислота	20	6.2	-		-
MOPS 3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота	20	7.2	-		-
Щавелевая кислота	25	1,3	4.3		-
Фосфорная кислота	25	2.1	7.2		12,7
TES 2-[трис(гидроксиметил)метил]аминоэтансульфокислота	20	7,5	-		-
Трифторуксусная кислота	25	0,3	-		-
Трицин N-[трис(гидроксиметил)метил]глицин	20	8.2	-		-
ТРИС Трис(гидроксиметил)аминометан	20	8.3	-		-
pK _b оснований при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы
Базы	Температура (°С)	ПК ₁	ПК ₂	ПК ₃
аммиак	25	9.3	-	-
Диэтиламин	20	11.1	-	-
Диметиламин	25	10,7	-	-
Этиламин	20	10,8	-	-
Этилендиамин	20	10.1	7,0	-
Метиламин	25	10,7	-	-
Морфолин	25	8.3	-	-
Триэтиламин (ТЭА)	18	11,0	-	-
Триметиламин	25	9,8	-	-

Позн: Размажь pH, пройди этот пуф входной je v rozsahu pK ± 1. Je třeba také vzít v uvahu UV Cutoff použitého pufru (табл. 2)

Applications and support in UHPLC

Хроно Уменьшение масштаба (перенос метода с традиционной ВЭЖХ на УВЭЖХ)

Пропускная способность пробы (Как мелкие частицы увеличивают пропускную способность пробы?)

Процедура уменьшения масштаба от обычной ВЭЖХ до УВЭЖХ требует оптимизации селективности и эффективности колонок. Как только мы закончим разработку этого метода, мы можем выполнить процедуру масштабирования. Для определения эквивалентных условий запуска можно использовать несколько простых расчетов . В этой статье они описаны последовательно.

Настройка размера столбца

Первый расчет определяет соответствующую длину столбца. Сохранение той же длины колонки при уменьшении размера частиц увеличит количество теоретических тарелок в данной длине колонки. Следовательно, длину столбца можно сократить без потери разрешения. Используя уравнение 1 и правильно регулируя длину столбца, мы можем сохранить такое же разделение.

Регулировка объема инъекции

Как только мы определили правильную длину колонки, мы можем определить соответствующий объем инъекции. Уменьшение внутреннего диаметра и длины колонки уменьшает общий объем колонки и вместимость пробы. Таким образом, мы должны изменить объем впрыска, как описано в уравнении 2 . Обратите внимание, что, поскольку общий объем колонки уменьшился, важно, чтобы растворитель пробы соответствовал исходному составу подвижной фазы. Несоответствие растворителей образца может привести к невоспроизводимым временам удерживания, эффективности и даже изменениям в селективности.

Регулировка расхода

Скорость потока должна быть отрегулирована для поддержания сравнимой линейной скорости через колонку с меньшим внутренним диаметром. Линейная скорость определяется как расстояние, которое проходит подвижная фаза во времени, тогда как скорость потока представляет собой объем подвижной фазы, который проходит во времени. Для поддержания той же линейной скорости, которая важна для поддержания эффективности, скорость потока должна уменьшаться по мере уменьшения внутреннего диаметра колонки. Кроме того, поскольку меньшие размеры частиц приводят к более высоким оптимальным линейным скоростям, изократические скорости потока следует рассчитывать с учетом размера частиц. Уравнение 3 можно использовать для простой и быстрой оценки скорректированной скорости потока, необходимой для эквивалентной хроматографии. Также важно отметить, что более высокие скорости потока меньше влияют на размер частиц <2 мкм, поэтому более высокие скорости потока можно использовать в изократических системах без отрицательного влияния на пиковую эффективность.

Настройка временной программы

Наконец, после того как мы определили правильную длину колонки, объем ввода и скорость потока, мы можем найти эквивалентное время, необходимое для градиентного или ступенчатого элюирования. По мере уменьшения масштаба аналитического метода временная программа также должна быть уменьшена, чтобы фазовые взаимодействия оставались прежними. Время можно отрегулировать с помощью уравнения 4 .

Ссылка на статью: Рик Лейк, Restek Corporation

Solvent viscosity

Зависимость вязкости от состава смеси растворителей

% воды	Вязкость (МеОН/вода)	Вязкость (AcCN/вода)
0	0,65	0,35
10	0,95	0,50
20	1,20	0,55
30	1,60	0,70
40	1,75	0,80
50	1,90	0,90
60	1,80	1,00
70	1,75	1,05
80	1,65	1.10
90	1,40	1,05
100	1,00	1,00

Chromatography tables

Выбор капилляров для различных скоростей потока

Выбор колонки в зависимости от объема впрыска и ее производительности

Подвижная фаза aditivum УФ-отсечка

pK _a кислых буферов при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы

pK _b оснований при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы

Преобразование давления

Оценка давления в зависимости от размера частиц, диаметра и длины колонки

Вязкость смесей растворителей

Характеристики растворителя