0 Сравнивать
Добавляйте товары к сравнению с помощью значка весов и тут же можете сравнить их параметры.
Пользователь
0 Корзина
Ваша корзина пуста...
Категория

Хроматография

Введение

Аминокислоты являются ключевыми строительными блоками жизни и играют ключевую роль в различных метаболических путях. В основном они действуют как промежуточные соединения, часто не задействуя напрямую белки. Из-за их химической сложности и динамического диапазона их надежный количественный и качественный анализ в биологических жидкостях и тканях имеет решающее значение для получения информации о питании, идентификации соединений и диагностики.

С этой целью был разработан простой, элегантный и на сегодняшний день самый быстрый метод анализа незаменимых аминокислот. Набор Metamino® на основе ЖХ/ГХ-МС предлагает комплексное решение до 75 метаболитов, включая основные протеиногенные аминокислоты, биогенные амины и коферменты, с возможностью дальнейшего расширения аналитов.

Данные масс-хроматограммы

Гигант. 1: Масс-хроматограмма внутренних стандартов SD1 и SD2. Разделение 5 нмоль аминокислот с помощью LC-MS Metamino®

Гигант. 2: Масс-хроматограмма реального образца: Разделение аминокислот в формуле пива Budvar 12˚ (25 мкл образца было нанесено на колонку). Высокая эффективность и высокое разрешение нашей колонки способствуют хорошему разделению пиков. Образец протестирован с помощью LC-MS Metamino®

Гигант. 3: Масс-хроматограмма реального образца: разделение аминокислот, присутствующих в сыворотке крови (25 мкл осажденной сыворотки наносили на колонку). Высокая эффективность и высокое разрешение нашей колонки способствуют хорошему разделению пиков. Образец протестирован с помощью LC-MS Metamino®

Базовые приготовления

После извлечения содержимого из матрицы можно приступить к подготовке проб для анализа ЖХ-МС/ГХ-МС.

Этот протокол лишь кратко описывает процедуру подготовки проб. Подробную процедуру можно найти в руководстве пользователя Metamino®.

Анализ ЖХ-МС происходит следующим образом:

  1. Отнесите пипеткой 100 мкл извлеченного содержимого (сыворотки, плазмы и т. д.) и добавьте 100 мкл среды осаждения. Центрифуга в течение 30–60 секунд при 1500 г (6000 об/мин).
  2. Отнесите пипеткой 25 мкл осажденного образца и добавьте 10 мкл раствора внутреннего стандарта в каждый флакон для подготовки проб.
  3. Внесите пипеткой 25 мкл раствора катализатора в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд.
  4. Внесите пипеткой 10 мкл раствора реагента в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Разрешить дериватизации продолжаться в течение по крайней мере 2-3 минут.
  5. Активируйте и уравновесьте сорбент в микроспиновом фильтре добавлением:
    1. 200 мкл среды активации MSPE, затем центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
    2. 200 мкл уравновешивающей сорбентной среды MSPE, затем центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
  6. Вылейте элюат через мембрану.
  7. Разбавьте реакционную смесь дериватизации 400 мкл среды для разбавления и промывки и перемешайте на вортексе в течение 5-10 секунд.
  8. Разбавленную реакционную смесь (обычно 450-500 мкл) наносят на увлажненный сорбент микроспинового фильтра и оставляют на 1-2 минуты. Центрифуга в течение 30–60 секунд при 1500 г (6000 об/мин).
  9. Вылейте элюат через мембрану.
  10. Сорбент промывают на микроспиновом фильтре 200 мкл разбавленной и промывной среды и центрифугируют от 30 до 60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
  11. Поместите микроспиновый фильтр в новый флакон для центрифуги, добавьте 200 мкл элюирующей среды и центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 г (6000 об/мин).
  12. Перенесите элюат во флакон автосамплера. Образец готов к анализу ЖХ-МС.

ГХ-МС анализ происходит следующим образом:

  1. Внесите пипеткой 25 мкл целевого образца и 10 мкл раствора внутреннего стандарта в каждую стеклянную реакционную пробирку.
  2. Внесите пипеткой по 20 мкл восстановителя в каждую стеклянную реакционную пробирку и кратковременно перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Дайте постоять 1-2 минуты.
  3. Внесите пипеткой по 25 мкл исходной среды в каждую реакционную стеклянную пробирку и добавьте 50 мкл раствора реагента (дериватизации) в каждую реакционную стеклянную пробирку и встряхивайте в течение 5–10 секунд.
  4. Внесите пипеткой 25 мкл раствора катализатора в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд.
  5. Внесите пипеткой 25 мкл раствора катализатора в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Дайте постоять 1-2 минуты. Эмульсия постепенно разделяется на два слоя.
  6. Внесите пипеткой 50 мкл экстракционной среды в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд.
  7. Внесите пипеткой 25 мкл кислой среды в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Затем центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
  8. Перенесите органический (верхний) слой (50–100 мкл) во флакон автосамплера с вкладышем. Образец готовят для анализа ГХ-МС.

Содержимое набора

Набор MetAmino ® содержит все реагенты, среды и химикаты. Содержимое стартового набора указано в таблицах ниже:

Содержимое набора ЖХ-МС на 100 образцов:

Элемент Тип флакона Объем во флаконе (мл) Количество флаконов (100 образцов)
Стандарты аминокислот, раствор SD1 флакон 2 мл 0,25 1
Стандарты аминокислот SD2 в виде порошка флакон 2 мл - 2
Внутренний стандартный раствор (IS) флакон 2 мл 1.1 1
Стандартная среда для разведения аминокислот (AASDM) флакон 4 мл 1,4 1
Сорбентная активационная среда MSPE (WES) флакон 40 мл 22 1
Уравновешивающая сорбентная среда MSPE (EQS) флакон 40 мл 22 1
Каталитический раствор (CTS) флакон 4 мл 2.2 1
Реагент (дериватизационный) реагент (РДС) флакон 4 мл 1.1 1
Среда для разбавления и промывки (DWM) флакон 40 мл 33 2
Элюирующая среда (ELM) флакон 40 мл 22 1
Осадительная среда (PM) флакон 40 мл 11 1

Элемент Количество (100 образцов) Примечание
Колонка MetAmino ® для ВЭЖХ 1 кусок Специальная стационарная фаза
Подставка на 80 центрифужных пробирок 1 кусок
Микроспиновые фильтры с сорбентом MetAmino ® 100 шт Внутренняя колонна вкл. Мембрана 0,22 мкм
Центрифужные пробирки (2 мл) 400 шт.
Флаконы для автосамплеров (винтовая крышка 9 мм) 100 шт Включая перегородку и веки

Состав набора ГХ-МС на 100 образцов:

Элемент Тип флакона Объем во флаконе (мл) Количество флаконов (100 образцов)
Стандарты аминокислот SD1 (раствор) флакон 2 мл 0,25 1
Стандарты аминокислот SD2 в виде порошка флакон 2 мл - 2
Решение с внутренними стандартами (ИС) флакон 2 мл 1.1 1
Стандартная среда для разведения аминокислот (AASDM) флакон 4 мл 1,4 1
Восстановитель (РА) флакон 4 мл 2,75 1
Базовое решение (БМ) флакон 4 мл 2,75 1
Каталитический раствор (CTS) флакон 40 мл 5,5 1
Реагент (дериватизационный) реагент (РДС) флакон 40 мл 5,5 1
Экстракционная среда (ЭМ) флакон 40 мл 5,5 1
Кислотная среда (АМ) флакон 4 мл 2,75 1

Элемент Количество Примечание
Колонка MetAmino ® GC 1 кусок Специальная стационарная фаза
Стеклянные реакционные пробирки 100 шт -
Подставка на 80 реакционных пробирок
Флаконы для автосамплеров (винтовая крышка 9 мм) 100 шт Включая перегородку и веки
Вставки для флаконов автосамплеров 100 шт -

Функции

  • В принципе подходит для любых матриц (моча, сыворотка крови, слеза, церебральная жидкость, экстракты тканей, экстракты почвы и т.д.)
  • Простая подготовка проб
  • Дериватизация и анализ образца менее 20 минут
  • Широкий портфель аналитов (75) с возможностью дальнейшего расширения.
  • Не требуется нагревание/замораживание пробы
  • Доступна библиотека NIST для ГХ/МС
  • Возможно определение веществ с низкой молекулярной массой, которые могут разлагаться в источнике ионов (например, GLY, ALA и т. д.).
  • Подходит для анализа веществ, которые трудно определить количественно, например, полиаминов.
  • В комплект входят все необходимые реагенты, аксессуары, колонка для ВЭЖХ и четкие инструкции по дериватизации и анализу с высокой точностью и чувствительностью.

Описание

Наши наборы MetAmino ® LC-MS и GC-MS обеспечивают быструю, надежную, воспроизводимую и точную процедуру анализа аминокислот, которая включает как подготовку проб, так и хроматографическое разделение.

Метод ЖХ-МС основан на твердофазной микроэкстракции с использованием специальных микроспиновых фильтров ( МСПЭ ) с недавно разработанным сорбентом и встроенной мембраной 0,22 мкм, метод ГХ-МС использует жидкостно-жидкостную микроэкстракцию ( ЖЖМЭ ). для подготовки. После этой предварительной обработки образец анализируют с помощью ЖХ-МС (ГХ-МС). В общей сложности подготовка образца для ЖХ-МС занимает около 8 минут, а анализ образца — 12 минут, поэтому все время эксперимента составляет всего 20 минут. Общее время эксперимента ГХ-МС еще короче – около 17 минут.

Этот уникальный набор отвечает всем лабораторным требованиям и предназначен для всех конечных пользователей, которым нужен простой аналитический метод и высокая эффективность разделения.

Часто задаваемые вопросы о МетАмино

Какой тип мембраны внутри спинового фильтра?
  • Мембрана изготовлена из нейлонового материала и имеет пористость 0,22 мкм. Его диаметр оптимизирован для использования с данным спиновым фильтром.
Можно ли расширить набор MetAmino® другими аналитами?
  • Да, набор MetAmino® можно расширить. Свяжитесь с нами для получения подробной информации.
Могу ли я использовать набор MetAmino® для анализа мочи?
  • Да, набор MetAmino® можно использовать для анализа мочи. Образец не должен содержать белков, поэтому перед использованием набора его необходимо обработать обычным способом (центрифугирование, фильтрация).
Можем ли мы заказать реагенты отдельно?
  • Да, весь набор реагентов можно заказать под каталожным номером MAK-5857-L002 .
Какое давление во время анализа ЖХ/МС?
  • В начале анализа давление 380 бар, в конце 200 бар.
Созданы ли MRM для аминокислот, перечисленных в наборе MetAmino®, после или до дериватизации стандартов?
  • Переходы MRM для AA, перечисленные в руководстве, указаны как переходы производных AA, а не собственного AA.
Следует ли гидролизовать образец корма перед работой с набором MetAmino® ?
  • Осаждение с использованием осаждающей среды (PM) не является необходимым шагом для успешной дериватизации образца. Набор тестировался в первую очередь для анализа биожидкостей, часто содержащих пептиды. Для предотвращения их осаждения в процессе дериватизации в протокол пробоподготовки был включен этап осаждения.
  • Если требуется общий анализ свободных и связанных с пептидами аминокислот, в этом случае мы рекомендуем провести гидролиз образца, а затем высушить аликвоту гидролизованного образца в токе азота или в спидваке. Растворяют высушенный остаток в 25 мкл деионизированной воды или 0,1 М водного раствора HCl (для лучшей растворимости) и действуют согласно инструкции, добавляя 10 мкл раствора IS.
  • Что касается гидролиза пептидов, используемые добавки (фенол, тиодигликоль) в среде гидролиза также могут быть дериватизированы (вероятно, не видны при « полном сканировании »). Поэтому мы рекомендуем 6M HCl в качестве среды гидролиза.
Можем ли мы заказать набор MetAmino® GC/MS для подготовки 400 образцов?
  • Пока нет, в настоящее время у нас есть только набор MetAmino® GC/MS для подготовки 100 образцов. Этот комплект можно заказать под каталожным номером MAK-5857-BA01.
В таблице 78 аминокислот, некоторые из которых отсутствуют в доступных стандартных смесях — так должны ли мы полагаться на переходы MRM и смотреть на время удерживания, или это стандарты, которые мы должны купить, если мы хотим их определить?
  • Для количественного определения набор MetAmino содержит - один флакон стандартного раствора SD1, входящего в состав набора, содержит 33 аминокислоты: AAA, ABA, ALA, APA, ARG, ASP, BAIBA, CC, CIT, CTH, GABA, GLU, GLY. , GPR, HIS, HLY, HYP, ILE, LEU, LYS, MET, 1MHIS, 3MHIS, ORN, PHE, PHP, PRO, SAR, SER, THR, TPR, TYR, VAL и SD2 во флаконе с лиофилизированной смесью 3 аминокислот : АСН, ГЛН, ГТО. Однако набор аминокислот может быть дополнительно расширен за счет других соединений, содержащих первичные или вторичные функциональные аминогруппы.
  • Массы (m/z), указанные в руководстве, верны и представляют собой ионы M+H+. Массы (m/z) и время удерживания из руководства были получены с помощью прибора с линейной ионной ловушкой LTQ, а данные из Сертификата анализа были получены с прибора Q Exactive plus HRMS. В обоих случаях использовали одну и ту же колонку, скорость потока и состав подвижной фазы. Время удерживания (ВУ) является экспериментальным значением, и расхождения, особенно для соединений с поздним элюированием, могут быть вызваны использованием разных приборов ЖХ/МС.

Обзор сорбентов МСПЭ

Сорбенты для метода МСФЭ выбираются с учетом максимально широкой области применения. MSPE SpeExtra C18 представляет собой гидрофобный тип октадецилсиликагеля со специальным концевым покрытием с очень широким применением. Он подходит для широкого спектра аналитов, показывая худшее удерживание полярных соединений. MSPE SpeExtra C18-P представляет собой полярно модифицированный мономерный октадецилсиликагель. Он предлагает различные типы взаимодействий: диполь-дипольное, π-π и гидрофобное. Поэтому он подходит для ароматических и полярных соединений. Полимерный сорбент MSPE SpeExtra HLB с высокой удельной поверхностью и специальным торцевым покрытием. Он имеет гидрофильную и липофильную модификации, обеспечивающие универсальное применение и более высокую емкость, чем силикагель С18.

Сорбент МСПЭ Размер частиц [мкм] Удельная поверхность [м 2 /г]
С18 60 310
С18-П 60 310
ГЛБ 30 850

Очистка и тестирование конопли

Конопля содержит сотни каннабиноидов, причем каннабидиол (КБД) является наиболее распространенным в растении, а Δ 9-тетрагидроканнабинол (ТГК) является активным ингредиентом, вызывающим психотропные эффекты. Однако есть гораздо больше соединений, которые производятся растением каннабис и которые были изучены на предмет их лечебных эффектов. Этот предел часто требует обработки дистиллированного экстракта каннабиса (удаление ТГК из исходного экстракта) и может быть достигнут с помощью препаративной хроматографии, такой как система puriFlashR XL-Cannabis. ВЭЖХ-анализ исходного материала (дистиллят), фракций, собранных в процессе очистки, и конечного продукта можно проводить с помощью аналитической системы Advion AVANT HPLC-UV. В этом пионе представлены как методы очистки, так и аналитические методы, которые представляют собой комплексное решение для удаления ТГК в конопляной промышленности.

  • Устройство puriFlah ® L-Cannabis с производительностью до 4,3 кг/день (внутренний диаметр колонн до 15 см)
  • PuriFlah ® XL-инструмент для каннабиса производительностью до 12,2 кг/день (внутренний диаметр колонн до 20 см в диаметре)
  • Считыватель планшетов Plate Express TLC

SPE Phases

SPE колонки

Этот сайт содержит обзор фаз SPE, включая их технические параметры. Дополнительную информацию о продуктах можно найти в каталоге продуктов .

Очистка колонок SPE

Гидрофобный с обратной фазой

Фаза Объем пор (см 3 /г) Размер пор (А) Площадь поверхности (м 2 /г) Углеродная нагрузка (%) Завершение Характерная черта
С2 Этил 0,77 60 500 6,6 ДА НЕТ
C4 н-бутил 0,77 60 500 8,5 ДА
C8 Октил 0,77 60 500 11.1 ДА НЕТ
C18 Октадецил 0,77 60 500 21,7 ДА НЕТ
C30 Триконтил 0,77 60 500 20,0 ДА
циклогексил 0,77 60 500 11,6 ДА НЕТ
Фенил 0,77 60 500 11,0 ДА НЕТ

Нормально-фазовый гидрофильный

Фаза Объем пор (см 3 /г) Размер пор (А) Площадь поверхности (м 2 /г) Углеродная нагрузка (%) Характерная черта
Кремнезем 0,77 60 500 Н/Д
Диол 0,99 60 500 8,0
цианопропил 0,77 60 500 9,0
Флорисил 0,82 60 500 Н/Д
Глинозем, кислотный 60 500 Н/Д
Глинозем, основной 60 500 Н/Д
Глинозем, нейтральный 60 500 Н/Д
Углерод Н/Д 120/140 меш

Ионный обмен - анионный обмен

Фаза Объем пор (см 3 /г) рКа Размер пор (А) Площадь поверхности (м 2 /г) Углеродная нагрузка (%) Обмен (мэкв/г)
Аминопропил (1 амин) 0,77 9,8 60 500 6,65 0,31
N-2 Аминоэтил (1/2 амин) 0,77 10,1; 10,9 60 500 11.1 0,32
Диэтиламино (3 амин) 0,77 10,6 60 500 10,6 0,28
Четвертичный аминохлорид 0,77 Всегда заряжен 60 500 8.4 0,25
Гидроксид четвертичного амина 0,77 Всегда заряжен 60 500 8.4 0,25
Четвертичный аминоацетат 0,77 Всегда заряжен 60 500 8.4 0,25
Четвертичный аминоформиат 0,77 Всегда заряжен 60 500 8.4 0,25
Полиимин 0,77 Всегда заряжен 13,5 0,25

Ионный обмен - катионный обмен

Фаза Объем пор (см 3 /г) рКа Размер пор (А) Площадь поверхности (м 2 /г) Углеродная нагрузка (%) Обмен (мэкв/г)
Карбоновая кислота 0,77 4,8 60 500 9.2 0,17
Пропилсульфоновая кислота 0,77 1 60 500 7.1 0,18
Бензолсульфоновая кислота 0,77 Всегда заряжен 60 500 11,0 0,32
Бензолсульфоновая кислота, высокая нагрузка 0,77 Всегда заряжен 60 500 15,0 0,65
Триуксусная кислота 0,77 60 500 7,61 Анион 0,17/Катион 0,06

Сополимерные фазы

Фаза Объем пор (см 3 /г) рКа Размер пор (А) Площадь поверхности (м 2 /г) Углеродная нагрузка (%) Обмен (мэкв/г)
Аминопропил + C8 0,77 9,8 60 500 12,3 0,163
Четвертичный амин + C8 0,77 Всегда заряжен 60 500 13,6 0,160
Карбоновая кислота + C8 0,77 4,8 60 500 2,5 0,105
Пропилсульфоновая кислота + C8 0,77 1 60 500 14,62 0,114
Бензолсульфоновая кислота + C8 0,77 Всегда заряжен 60 500 12.3 0,072
Цианопропил + C8 0,77 Н/Д 60 500 14,6 0,163
Циклогексил + C8 0,77 Н/Д 60 500 Н/Д Н/Д