Phone +420 274 021 211
O nás
Kontakt
SK
Vyhľadať
0 Porovnať
Pridajte si do porovnania produkty pomocou ikonky váh a tu si potom môžete porovnať ich parametre.
Užívateľ
0 Košík
Váš košík je prázdny...
MENU
  1. Chromservis
  2. Chromatografie
Kategórie
Flash a preparatívna HPLCGC/MS-TOF
    GC/MS/MS
      MetAmino kitPrepočty jednotiekRady a tipySlovník pojmov
        Stacionárne fázeStriekačkyUHPLC

        Chromatografia

        Vlastnosti rozpúšťadiel

        Solventný Index polarity Index lomu (20°C)

        UV (nm) cutoff

        (1 AU)

        		 Bod varu (°C)

        Viskozita

        (mPa.s; 20 °C)

        		 Miešateľnosť s vodou
        Octová kyselina 6.2 1,372 230 118 1,26 100
        Acetón 5.1 1,359 330 56 0,32 100
        Acetonitril 5.8 1,344 190 82 0,37 100
        Benzén 2.7 1 501 280 80 0,65 0,18
        Butylacetát 4.0 1 094 254 125 0,73 0,43
        n-butanol 3.9 1,399 215 118 2,98 7,81
        Tetrachlorid uhličitý 1.6 1,466 263 77 0,97 0,08
        Chloroform 4.1 1,466 245 61 0,57 0,815
        Cyklohexán 0,2 1,426 200 81 1,00 0,01
        Etylénchlorid 3.5 1,444 225 84 0,79 0,81
        Metylénchlorid 3.1 1,424 235 41 0,44 1,6
        Dimetylformamid 6.4 1,431 268 155 0,92 100
        Dimetylsulfoxid 7.2 1,478 268 189 2,00 100
        Dioxán 4.8 1,422 215 101 1,54 100
        Etylacetát 4.4 1,372 260 77 0,45 8,7
        Etanol 5.2 1,360 210 78 1,20 100
        Dietyléter 2.8 1,353 220 35 0,32 6,89
        Heptan 0,0 1,387 200 98 0,39 0,0003
        Hexán 0,0 1,375 200 69 0,33 0,001
        Metanol 5.1 1,329 205 65 0,60 100
        Metylbutyléter 2.5 1,369 210 55 0,27 4,8
        Metyletylketón 4.7 1,379 329 80 0,45 24
        Pentán 0,0 1,358 200 36 0,23 0,004
        n-Propanol 4.0 1,384 210 97 2,27 100
        isoPropanol 3.9 1,377 210 82 2,30 100
        Diizopropyléter 2.2 1,368 220 68 0,37
        Tetrahydrofurán 4.0 1,407 215 65 0,55 100
        Toluén 2.4 1,496 285 111 0,59 0,051
        Trichlóretylén 1,0 1,477 273 87 0,57 0,11
        Voda 9,0 1,333 200 100 1,00 100
        Xylén 2.5 1 500 290 139 0,61 0,018

        Závislosť viskozity zmesi rozpúšťadiel na jej percentuálnom zložení

        % z vody Viskozita (MeOH/voda) Viskozita (ACN/voda)
        0 0,65 0,35
        10 0,95 0,50
        20 1,20 0,55
        30 1,60 0,70
        40 1,75 0,80
        50 1,90 0,90
        60 1,80 1,00
        70 1,75 1,05
        80 1,65 1,10
        90 1,40 1,05
        100 1,00 1,00

        Graf

        Odhad tlaku na HPLC kolónach v závislosti od veľkosti častíc, priemeru a dĺžky kolóny

        Veľkosť častíc (µm) ID (mm) Prietok (ml/min)

        Tlak 150 mm* (PSI)

        Tlak 250 mm* (PSI)
        3 4,6 0,5 – 1,0 1000 1500
        5 3,0 0,4 – 0,8 750 1250
        5 4,6 1,0 - 2,0 700 1100
        5 10,0 5,0 – 10,0 750 1250
        10 4,6 2,0 – 5,0 400 600
        10 10,0 10,0 – 20,0 500 800
        10 21,2 20,0 – 40,0 300 500

        * Pri prietoku na dolných hraniciach odporúčaných prietokov

        Voľba kapilár pre rôzne prietoky

        ID Prietok Farba OD
        0,13 mm Až 2,0 ml/min Červené 1/16"
        0,18 mm Až 5,0 ml/min Žltá 1/16"
        0,25 mm Až 20 ml/min Modrý 1/16"
        0,50 mm Až 50 ml/min oranžový 1/16"
        0,75 mm Až 100 ml/min Zelená 1/16"
        1,0 mm Až 200 ml/min Šedá 1/16"
        1,59 mm Až 500 ml/min 1/8"".
        2,40 mm Až 1000 ml/min 1/8"".

        Palce na mm – palec x 25,4 = mm

        Stopy na meter – stopy x 0,3048 = meter

        Tlak na kolóne pri prietoku 1 ml/min

        P = 2,1 xdx 10,13 xh /h 2 x vp 2

        P – tlak (MPa)
        L – dĺžka kolóny v mm
        h - dynamická viskozita (pre vodu = 1)
        d – vnútorný priemer kolóny v mm
        vp – veľkosť častíc v µm

        Tlak na kolóne 4,6 x 250 mm, 5 um bude pri prietoku 1,0 ml/min cca 100 bar

        Voľba kolóny v závislosti od veľkosti nástreku a jej kapacity

        ID (mm) Hodnota nástreku (µl)

        Kapacita kolóny (mg)

        		 Prietok (ml/min)
        4,6 5-100 1 0,5 – 2,0
        10 100–1000 5 4,0 – 15,0
        21,2 1000 – 5000 20 10 – 50
        30 2000 – 10 000 40 40 – 100
        50 5000 – 20 000 120 100–300
        100 10 000 – 50 000 500 400–1000

        pK kyselín a zásad používaných ako aditívum pre mobilné fázy HPLC

        pK a kyslých a zásaditých pufrov v HPLC na prípravu mobilnej fázy

        Kyslý pufer Teplota (°C) pK 1 pK 2 pK 3
        ACES 2-[(2-amino-2-oxoetyl)amino]etansulfónová kyselina 20 6.9 - -
        Octová kyselina 25 4.8 - -
        Kyselina boritá 20 9.1 12.7 13.8
        CAPS 3-(cyklohexylamino)ethansulfónová kyselina 20 10.4 - -
        Kyselina citrónová 25 3.1 4.8 6.4
        Kyselina mravčia 20 3.8 - -
        Glycín 25 2.3 9.6 -
        Glycylglycín 20 8.4 - -
        HEPES N-2-hydroxyetylpiperazín-N'-2-ethansulfónová kyselina 20 7.6 - -
        Imidazol 20 7,0 - -
        MES 2-(N-morfolino)ethansulfónová kyselina 20 6.2 - -
        MOPS 3-(N-morfolino)propansulfónová kyselina 20 7.2 - -
        Kyselina šťaveľová 25 1.3 4.3 -
        Kyselina fosforečná 25 2.1 7.2 12.7
        TES 2-[tris(hydroxymetyl)metyl]aminoethansulfónová kyselina 20 7.5 - -
        Kyselina trifluoroctová 25 0,3 - -
        Tricín N-[tris(hydroxymetyl)metyl]glycín 20 8.2 - -
        TRIS Tris(hydroxylmetyl)aminometán 20 8.3 - -
        pKb báz pri HPLC na prípravu mobilnej fázy
        Zásaditý pufer teplota (°C) pK 1 pK 2 pK 3
        Amoniak 25 9.3 - -
        Dietylamín 20 11.1 - -
        dimethylamín 25 10.7 - -
        Etylamín 20 10.8 - -
        Etylendiamín 20 10.1 7,0 -
        metylamín 25 10.7 - -
        Morfólín 25 8.3 - -
        trietylamín (TEA) 18 11.0 - -
        trimetylamín 25 9.8 - -

        Pozn: Rozmedzie pH, pre ktoré je vhodný vhodný je v rozsahu pK ± 1. Je potrebné vziať do úvahy UV Cutoff použitého pufra (tab. 2)

        Aplikace a podpora v UHPLC

        ChronometrPřenos metody (z konvenční HPLC do UHPLC)

        Kapacita vzorků (jak ovlivní menší částice kapacitu vzorků?)

        Přenos metod do UHPLC

        Přenos metod z klasické HPLC do UHPLC vyžaduje nejprve optimalizaci selektivity a účinnosti kolony pro požadovanou aplikaci. Jakmile je tato část vývoje metody hotová, můžeme přistoupit k přenosu metody do UHPLC. K tomu nám poslouží několik jedhoduchých výpočtů, které pomohou stanovit ekvivalentní podmínky separace. Tento článek je postupně popisuje.

        VýpočetVolba délky kolony

        První výpočet stanovuje vhodnou délku chromatografické kolony. Při zachování délky kolony a snižování velikosti částic se zvýší počet teoretických pater dané kolony. Proto můžeme kolonu zkrátit aniž bychom ztratili rozlišení. Použitím vzorce 1 a volbou vhodné délky kolony docílíme zachování stejné separace jako u knovenční HPLC.

        Optimalizace nástřikového objemu

        Jakmile jsme stanovili vhodnou délku kolony, můžeme optimalizovat objem nástřiku. Snižováním vnitřního průměru a délky kolony se sníží její celkový objem a kapacita vzorku. Proto musíme upravit nástřikový objem podle vzorce 2. Zde je nutné si uvědomit, že díky snížení celkového objemu kolony je velice důležité, aby byla zajištěna kompatibilita rozpouštědla vzorku se složením mobilní fáze. V opačném případě dojde k nereprodukovatelnosti retenčních časů, účinnosti a dokonce může dojít ke změně selektivity.

        VýpočetNastavení průtoku

        Průtok je nutné nastavit tak, aby byla u menší kolony zajištěna vhodná lineární rychlost. Ta je definována jako vzdálenost, kterou dosáhne mobilní fáze za časovou jednotku (na rozdíl od průtoku, který je definován jako objem mobilní fáze, který prochází chromatografickou kolonou za čas). Abychom zachovali stejnou lineární rychlost, která je důležitá pro zachování účinnosti, musí být průtok mobilní fáze snížen se zmenšením průměru kolony. U izokratické separace lze průtok kolonou vypočítat podle vzorce 3 (nutno vzít v úvahu i velikost částic). Tím bychom měli snadno a rychle odhadnout nastavení průtoku pro ekvivalentní chromatografii. Zde je důležité si uvědomit, že částice s velikostí pod 2µm jsou méně ovlivňovány při vyšších průtocích a proto mohou být použity vyšší průtoky v izokratických separacích bez škodlivých účinků na účinnost separace.

        Nastavení časového programu

        Na závěr, po optimalizaci délky kolony, nástřikového objemu a průtoku, můžeme přistoupit k nastavení začátku gradientu. Při přenosu metody z konvenční HPLC do UHPLC musíme upravit počátek gradientu tak, aby docházelo k interakcím fáze ve stejnou dobu. Tu nastavíme pomocí vzorce 4.

        Literatura: Rick Lake, Restek Corporation

        Vizkozita rozpouštědel

        Závislost viskozity směsí rozpouštědel na jejích procentuálním složení

        % vody viskozita (MeOH/voda) viskozita (AcCN/voda)
        0 0.65 0.35
        10 0.95 0.50
        20 1.20 0.55
        30 1.60 0.70
        40 1.75 0.80
        50 1.90 0.90
        60 1.80 1.00
        70 1.75 1.05
        80 1.65 1.10
        90 1.40 1.05
        100 1.00 1.00

        Tabulky pro chromatografii

        Volba kapiláry pro různé průtoky

        Výběr kolony v závislosti na velikosti nástřiku a kapacitě kolony

        UV cutoff aditiv mobilních fází

        pKa kyselých pufrů v mobilních fázích pro HPLC

        pKb bází v mobilních fázích pro HPLC

        Přepočty jednotek tlaku

        Odhad tlaku na kolonách v závislosti na velikosti částic, průměru a délce kolony

        Viskozity směsí rozpouštědel

        Vlastnosti rozpouštědel

        Navštívené (3)