Chromatografie / CHROMSERVIS.EU

Použití chirálních kolon

Víte jak správně používat chirální kolony na bázi celulózy/amylózy?

Chirální kolony jsou transportovány v směsi n-hexan/2-propanol (9:1, v/v). Každá kolona je individuálně testována a je vždy opatřena certifikátem kvality a separačními parametry pro stanovení trans-stilbene oxidu.

Použití mobilních fází

Kolony mohou být použity jak v normální fázi (směsi n-alkanů/alkoholů), v reverzní fázi (směsi voda/MeOH, voda/ACN a pufr/MeOH a pufr/ACN), nebo v polárních organických rozpouštědlech (100% ACN, nižší alkoholy a jejich směsi).

Kompatibilita mobilních fází

Při změnách mobilní fáze je vždy třeba dodržet stanovený postup promytí kolon. Je třeba pokaždé vyhodnotit mísitelnost jednotlivých použitých rozpouštědel. Pro bezpečné převedení kolony z hexanu do metanolu (ACN) a opačně použijte vždy jako transportní solvent 100% 2-propanol při průtoku 0,2 – 0,5 mL/min. Pro spolehlivé odstranění původní mobilní fáze propláchněte kolonu přibližně 10-ti násobkem objemu kolony (tzn. 25 ml 100% 2-propanolu pro kolonu 250 x 4,6 mm, 15 ml pro 150 x 4,6mm). Dále, pokud je použit pufr nemísitelný s 2-propanolem pak kolonu ještě propláchněte před a po použití tohoto pufru 100% vodou.

Použití modifikátorů mobilní fáze

Pro některé kyselé či bazické chirální látky je třeba použít specifických modifikátorů MF za účelem dosáhnutí správné chirální separace či požadovaného tvaru píků. Dietylamin, etanolamin nebo butylamin v koncentracích 0,1 – 0,5 % mohou být použity pro bazické vzorky, zatímco octová či trifluor octová kyselina typicky v koncentraci 0,1 – 0,2% pro vzorky kyselé. Směsi bazických a kyselých aditiv jsou rovněž možné, např. dietylamin acetát či trifluor acetát. Kolony Lux poskytují stejné výsledky při použití všech výše uvedených rozpouštědel a modifikátorů MF v uvedených koncentracích.

Nekompatibilní rozpouštědla

Chirální kolony jsou vyrobeny vázáním různých derivátů polysacharidů na povrch silikagelu. Proto veškerá rozpouštědla rozpouštějící deriváty polysacharidů nesmí přijít do styku se stacionární fází, a to i v jakékoli koncentraci, např. THF, aceton, chlorované uhlovodíky, etylacetát, dimetylsulfoxid, DMF, N-metylformamid apod.

Tlakový limit

Průtok mobilní fáze by měl být nastaven tak, aby zpětný tlak nepřekročil hodnotu 300 barů (4300 psi).

Pracovní teplota

Za použití standardních mobilních fází (jako např. n-alkany/alkoholy) je teplotní rozsah kolon 0-50°C.

Uchovávání kolon

Pro déle trvající uskladnění je doporučeno skladovat kolony ve směsi n-hexan/2-propanol (9:1, v/v). Kolony používané v reverzní MF by měli být nejprve promyty vodou (kdykoli byl použit pufr jako modifikátor reverzní MF) a poté metanolem a/nebo pouze metanolem pokud pufr nebyl použit. Kolona může být rovněž uskladněna v metanolu.

Prodloužení životnosti chirálních kolon

Chromservis doporučuje použit univerzálního systému ochrany analytických kolon a odpovídajících předkolonek k zajištění dlouhodobé a bezproblémové separace na kolonách, zvláště při separacích vzorků získaných ze složitých a komplexních matric. Optimálně by měl být vzorek kompletně rozpuštěn v odpovídající MF a poté filtrován přes stříkačkový filtr o porozitě 0.45 µm.

Rady a tipy

Laboratoř Tato stránka obsahuje technické informace, tipy a rady pro vaše rozhodování a doporučení při výběru chromatografického příslušenství.

Dynamický headspace

Metoda dynamický headspace (DHS) se využívá pro širokou řadu environmentálních aplikací. Největší její použití je při analýze těkavých organických látek (VOC) v pitné, podzemní, povrchové a odpadní vodě. Tyto matrice obsahují směs sloučenin různé polarity a těkavosti (chlorované uhlovodíky, aromatické uhlovodíky, kyslíkaté sloučeniny apod). Dynamický headspace se dále využívá pro tyto aplikace:

charakterizace koření, bylinek, potravin, mýdel a voňavek
stanovení reziduálních monomerů a VOC v polymerech
analýza zbytkových rozpouštědel v potravinářských obalech a farmaceutických produktech
ověřování "bio-potravin"
stopová analýza aktivních farmaceutických látek
analýza metabolitů v biologických kapalinách (aromatické uhlovodíky v moči, benzen v krvi)

Principle of dynamic headspace

Instalace kapilárních GC kolon

Stručný postup při instalaci kapilárních GC kolon

Poznámka: Je-li kolona nová, musíte provést její kondicionování dříve, než budete nastavovat optimální mrtvý čas.

Přepočty jednotek

Objem HPLC kapilár

ID (mm)	ID (inch)	µl/cm	µl/inch	ID (mm)	ID (inch)	µl/cm	µl/inch
0.050	0.002"	0.02	0.05	1.00	0.040"	7.85	20.59
0.064	0.0025"	0.03	0.08	1.40	0.055"	15.39	38.93
0.075	0.003"	0.04	0.12	1.52	0.060"	18.15	46.33
0.10	0.004"	0.08	0.21	1.59	0.062"	19.86	49.47
0.13	0.005"	0.13	0.32	1.65	0.065"	21.38	54.38
0.17	0.0067"	0.23	0.58	1.70	0.067"	22.70	57.78
0.18	0.007"	0.25	0.63	1.78	0.070"	24.88	63.06
0.25	0.010"	0.49	1.29	2.00	0.079"	31.42	80.32
0.38	0.015"	1.13	2.90	2.10	0.083"	34.64	88.66
0.50	0.020"	1.96	5.15	2.16	0.085"	36.64	92.99
0.75	0.030"	4.42	11.58	2.40	0.094"	45.24	113.72

UV cutoff aditiv pro mobilní fázi

Aditivum	UV cutoff (nm)
Kyselina octová, 1%	230
Octan amonný, 10 mM	205
Uhličitan amonný, 10 mM	190
Hydrogenfosforečnan amonný, 50 mM	205
CAPS 3-(cyklohexylamino)ethansulfonová kyselina, 0,1 %	215
EDTA, 1 mM	190
Kyselina chlorovodíková, 0,1 %	190
Hydrogenfosforečnan vápenatý, 10 mM	190
Hydrogenfosforečnan vápenatý, 10 mM	190
MES 2-(N-morfolino)ethansulfonová kyselina, pH 6,0, 10 mM	215
Octan sodný, 10 mM	205
Citrát sodný, 10 mM	225
Dodecylsulfát sodný, 10 mM	190
Formiát sodný, 10 mM	200
Natrium-hexansulfonová kyselina, 5 mM	225
TEA, (triethylamin), 1%	235
TFA (kyselina trifluoroctová), 0,1 %	190
Tetrabutylamonium dihydrogenfosfát, 5 mM	200
TRIS HCl (Tris(hydroxylmethyl)aminomethan), pH 7,0, 20 mM	202
TRIS HCl (Tris(hydroxylmethyl)aminomethan), pH 8,0, 20 mM	212

Přepočty jednotek a tabulky

On-line přepočty jednotek:

Dávkovací čerpadla

Dávkovací čerpadla nacházejí uplatnění v mnoha aplikacích, a to jak v laboratořích, tak i v průmyslu. Často se zde setkáváme, že je potřeba dávkovat za speciálních podmínek:

Dávkování za vysokého tlaku (reaktory, tlakové aparatury)
Dávkování při vysokých teplotách
Vstřikování vysoce reaktivních kapalin
Dávkování viskózních kapalin

Pump Head Pro všechny tyto aplikace je možné využít technologie dávkování, která se využívá v oblasti vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Jedná se o dvoupístová čerpadla AZURA (Knauer), která jsou vybavena safírovými písty, které zajišťují velmi přesné, plynulé a vysokotlaké dávkování. Čerpadla mohou pracovat s průtokem 0,01 až 1000 ml/min, při teplotách -10°C až +120°C a s viskózními médii do 1000 mPa.s.

Čerpadla mohou být upravena i tak, že je lze využívat například v prostředí s nebezpečím výbuchu nebo v uzavřených atmosférách.

Příkladem vysoké odolnosti čerpadel AZURA je použití při dávkování oxidu sírového při výrobě metansulfonové kyseliny (MSA), jejíž uplatnění je především v čistících prostředcích.

Materiály

Hlavy dávkovacích čerpadel se vyrábějí z různých materiálů:

Keramika
Hastelloy C-276
Nerezová ocel
Titan
Kombinace nerezová ocel/titan

Informace o nabízených modelech najdete zde.

Linery TOPAZ

True Blue Performance

Topaz™ deaktivace:

Patentovaná chemická deaktivace lineru plynnou fází
Deaktivace vaty až v linerech
Dostupné v populárních designech a v modré rozlišovací barvě
Vysoká inertnost, nízká diskriminace aktivních analytů
Symetrický tvar kyselých i bazických analytů
Zvýšená správnost a opakovatelnost výsledku
Snížení detekčních limitů

Mnoho chromatografických problémů, jako např. špatná odezva, chybějící nebo chvostující píky je způsobeno aktivitou v nástřikovém lineru. Tyto nepříznivé efekty ztěžují identifikaci a kvantifikaci především u stopových analýz. Navá řada linerů TOPAZ™ firmy Restek nabízí výjimečnou inertnost, zlepšený přenos analytu na chromatografickou kolonu a vyšší symetrii píků. Vysoká inertnost linerů TOPAZ™ je zajištěna unikátním procesem deaktivace, který zajišťuje pasivaci povrchu lineru i křemenné vaty uvnitř a má za následek minimální ovlivnění reaktivních analytů.

Některé typy deaktivací, jako např. bazická, jsou účinné pouze na vybranou skupinu sloučenin. Naproti tomu vyvážená technologie deaktivace linerů TOPAZ™ brání interakcím mnoha chemických sloučenin. typickou ukázkou vysoké inertnosti je rozklad Endrinu a DDT v injektoru, kdy linery TOPAZ™ mají pouze 4,8% rozkladu Endrinu a 1,3% rozkladu DDT. Ve srovnání s jinými technologiemi deaktivace se jedná o poloviční nebo dokonce třetinovou ztrátu analytu!

Výběr linerů podle používaného přístroje najdete zde.

puriFlash RP

Více o stacionární fázích Flash kolon

Zde najdete detailní informace k jednotlivým reverzním stacionárním fázím používaných pro Flash chromatografii.

Reverzní fáze

puriFlash® RP-AQ

60Å - 500 m²/g

15 & 30 μm

RP-alkyl, 6% uhlíku

End-capping: mixed

Stabilita pH: 2.0 až 7.5

Separace/purifikace silně nebo středně polárních molekul

puriFlash® C18-AQ

100Å - 300 m²/g

5, 10, 15 & 30 μm

C18 mono-functional, 14% uhlíku

End-capping: mixed

Stabilita pH: 2.0 až 7.5

Separace/purifikace středně polárních a nepolárních molekul

puriFlash® C18-HP

100Å - 300 m²/g

5, 10, 15, 30 & 50 μm

C18 mono-functional, 16,5% uhlíku

End-capping: one-step

Stabilita pH: 1.5 až 7.5

Vynikající volba pro rutinní purifikace

Uptisphere® Strategy™ C18-HQ

100Å - 425 m²/g

1.7, 2.2, 3, 5, 10, 15 μm

C18 mono-functional, 19% uhlíku

End-capping: multi-step

Stabilita pH: 1.0 až 10.0

Vhodná pro mnoho farmaceutických aplikací a rutinní metody

puriFlash® C18-XS

100Å - 300 m²/g

5, 10, 3, 15 & 30 μm

C18 mono-functional, 17% uhlíku

End-capping: multi-step

Stabilita pH: 1.0 až 10.0

Vynikající fáze pro kompletní separaci bazických molekul

K dispozici je daleko širší množství stacionárních fází. kontaktujte nás pro více informací ohledně purifikací v režimu Flash chromatografie.